甘草养阴汤现代医学方解,之甘草抗炎作用(用斑马鱼做的验证)
2022年08月25日 8287人阅读 返回文章列表
参考文献:余景滔,周红玲,刘俊珊,许霓珊,全景羽,卢子滨,刘东依,曹惠慧,余林中.基于斑马鱼炎症模型的凉膈散及其组分甘草不同极性部位的抗炎活性评价及作用机制[J/OL].中国实验方剂学杂志:1-14[2022-08-22].DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.20221938.
研究已证实,LPS诱导炎症发生的过程,首先是激活生物体内细胞的细胞膜上跨膜受体蛋白 TLR4,进一步激活NF-κB通路,释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)等炎症细胞因子,导致了炎症的发生。甘草在中药复方中应用极为广泛,有“十方九草”之说。现代药理研究表明甘草也具有显著的抗炎作用:甘草水煎液可显著抑制小鼠二甲苯性耳肿胀、大鼠蛋清性足肿胀及抑制棉球肉芽肿的增生。甘草的抗炎机制研究显示,甘草及其活性成分不仅可通过影响炎症相关细胞发挥抗炎作用,而且又可对多种炎症因子产生影响从而抑制炎症反应。与此同时,甘草及其活性成分还可对与炎症相关的肝药酶发生作用。但甘草各部位对LPS所致炎症斑马鱼的保护作用及机制也尚不明确。因此,本研究将基于斑马鱼炎症模型对甘草不同极性部位的抗LPS活性进行评价,并针对其中发挥抗炎作用的机制进行探索。
利用相似相溶原理分离得到甘草的不同极性部位,随机选择受精后三天的斑马鱼,暴露于不同浓度的药物提取物中进行为期24、48、72 h的毒性观察;斑马鱼卵黄囊显微注射0.5 g·L-1 LPS 造模,浸泡给予不同浓度的甘草提取物,统计72 h 内斑马鱼的生存数目并在显微镜下观察12 h时斑马鱼卵黄囊中性粒细胞的聚集情况;苏木精-伊红染色对 LPS 显微注射斑马鱼卵黄囊进行组织病理学分析;实时荧光定量PCR进一步探讨凉膈散及甘草体内抗炎作用及其可能的机制。结果显示甘草提取物毒性随着极性升高而降低,药物的毒性大小依次为石油醚部位>乙酸乙酯部位>正丁醇部位>水部位;与LPS模型组比较,甘草提取物均能提高 LPS 斑马鱼炎症模型的动物生存率,抑制斑马鱼卵黄囊中性粒细胞的聚集及炎症细胞浸润,其中甘草乙酸乙酯部位的效果最为显著(P<0.01);此外,与 LPS 模型组比较,甘草乙酸乙酯部位降低了斑马鱼炎症模型中促炎细胞因子白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的 mRNA 表达,抑制了LPS 诱导的 Toll 样受体 4(TLR4)和核转录因子-κB(NF-κB)的上调(P<0.01)。结论:甘草的不同提取部位对 LPS 炎症均有保护作用,其机制可能是与抑制 TLR4和 NF-κB 信号通路相关;在斑马鱼模型中,浸泡给药方式适用于中药的抗 LPS 活性筛选。
正常对照组
模型组
甘草水提物治疗组
甘草正丁醇治疗组
图 1 甘草对斑马鱼卵黄囊部位中性粒细胞的招募和聚集的影响
图3 甘草提取物作用机制
斑马鱼可作为一种既快速又经济的药物筛选模式动物。近年来随着基因编辑技术在斑马鱼研究中的广泛应用,使许多人类已知疾病得以在斑马鱼身上复制。因此,斑马鱼已被广泛用作肿瘤、炎症等人类疾病研究的动物模型。
现代研究表明,TLR4/NF-κB 信号转导与炎症的调节密切相关。其中,TLR4 作为机体固有免疫中起重要作用的模式识别受体之一,可介导 LPS 信号转导,进而通过依赖性髓样分化因子(MyD88)或非依赖性 MyD88两条传导途径,激活下游 NF-κB 核转录调节因子,NF-κB 的活化可增加促炎细胞因子的分泌,上调下游炎症介质的表达,导致炎症的发生与加重。TLR4 过表达增强了 LPS 诱导的急性炎症作用,促使中性粒细胞的激活和炎症因子 TNF-α 的表达上调。以上研究表明,TLR4/NF-кB 在炎症信号转导中发挥着重要作用,以 TLR4/NF-кB 为靶点阻断 LPS 信号转导途径,可成为临床抗内毒素炎症的一个有效靶点。
本研究作者探讨了 TLR4 和 NF-кB 在 LPS 诱导的斑马鱼卵黄囊炎症的作用,Real-time PCR 结果发现,LPS 刺激后,TLR4 和 NF-кB 在斑马鱼卵黄囊的表达显著升高,甘草的不同提取部位可以保护斑马鱼因内毒素引起的死亡,抑制斑马鱼卵黄囊中性粒细胞的聚集,表明甘草具有一定的抗内毒素作用;甘草乙酸乙酯部位可通过抑制 TLR4 信号通路和 NF-κB 的激活,抑制促炎细胞因子 IL-6 和 TNF-α 的表达,从而发挥抗炎调节作用。